توانائی تولید افلاتوکسین‌های B1، B2، G1 و G2 در تعدادی از گونه های قارچ آسپرژیلوس به روش کروماتوگرافی مایع با کارائی بالا (HPLC)

دو فصلنامه تحقیقات بیماریهای گیاهی

مقاله 6، دوره 2، شماره 2، آذر و دی 1393، صفحه 55-70   

نوع مقاله: مقاله پژوهشی

نویسندگان

فاطمه اصغرنژاد¹؛ صفرعلی مهدیان^{* 2}؛ بهنام امیری بشلی²؛ سید سامان سید جعفر نظری³

¹دانشجوی کارشناسی ارشد گروه گیاهپزشکی، دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی ساری، ساری، ایران.

²استادیار گروه گیاهپزشکی، دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی ساری، ساری، ایران

³دانشجوی دکتری رشته شیمی تجزیه دانشگاه مازندران، ساری، ایران

تاریخ دریافت: 26 آبان 1393،  تاریخ پذیرش: 26 آبان 1393 

چکیده

افلاتوکسین ها متابولیت‌های ثانویه شدیداً سمی گونه های به خصوصی از قارچ آسپرژیلوس هستند که به دنبال رشد روی طیف وسیعی از محصولات کشاورزی و غذائی تولید می شوند. در این بررسی به ارزیابی تولید افلاتوکسین های B₁، B₂، G₁ و G₂ در چند گونه قارچ Asprgillus شامل: A. terreus،A. ustus، A. candidus، A. carneus، A. ostianus، A. auricomus، A. niveus، A. niger، A. fumigatus، A. parasiticus، A. caespitosus،A. awamori و A. sclerotiorum در محیط کشتی مناسب و ساده (سیب زمینی دکستروز براث PDB) و به روش کروماتوگرافی مایع با کارائی بالا (HPLC) پرداخته شده است. قارچ های یاد شده پس از جداسازی و خالص سازی مورد شناسایی قرار گرفتند و در 50 میلی لیتر محیط PDB مایه زنی شدند. قارچهای مایه زنی شده در شرایط مشابه محیط طبیعی رشد قارچ در دمای 26 درجه سانتیگراد، رطوبت 80% و تاریکی به مدت22 روز نگهداری و سپس افلاتوکسین های حاصل از آن‌ها استخراج شد. ترشحات قارچی نمونه ها توسط 10 میلی لیتر کلروفرم از عصاره فیلتر شده محیط غذائی استخراج و پس از تبخیر حلال، رسوب حاصله در 3 میلی لیتر متانول حل و فیلتر شده و به دستگاه HPLC تزریق گردید. نتایج آزمایشات نشان داد از میان 13 گونه قارچ آسپرژیلوس، گونه A. parasiticus بیشترین میزان افلاتوکسین کل را تولید نمود. افلاتوکسین G₁ در گونه‌های A. terreus، A. fumigatus،  A. carneus، A. niveus، A. parasiticus، A. caespitosus، A. ostianus و A. niger تولید نشد و افلاتوکسین G₂ در گونه‌های A. niveus، A. ostianus، A. niger وA. sclerotiorumو افلاتوکسین B₂ در گونه‌های A. carneus و A. sclerotiorum و افلاتوکسین B₁ در گونه A. ostianusتولید نشدند. در گونه A. parasiticus میزان تولید افلاتوکسین B₁ بیشترین و افلاتوکسین  G₁ کمترین مقدار در بین چهار نوع افلاتوکسین مورد آزمایش بود.

کلیدواژه‌ها

آسپرژیلوس؛ مایکوتوکسین؛ افلاتوکسین؛ ایمنی غذایی؛ HPLC

عنوان مقاله [English]

Investigation of the production of B1, B2, G1 & G2 aflatoxins in some species of Aspergillus with high performance liquid chromatography (HPLC) methods

نویسندگان [English]

F. Asgharnezhad¹؛ S. Mahdian²؛ B. Amiri Besheli²؛ S. Jafar Nazari³

چکیده [English]

Aflatoxins are very toxic secondary metabolites of some, Aspergilluss sp. that are produced when these fungi grow on different agricultural products under special environmental circumstances. In this study aflatoxinsB₁, B₂, G₁ and G₂ in some species of Aspergillus were investigated. These fungi included A. terreus, A. ustus, A. candidus, A. carneus, A. ostianus, A. auricomus, A. niveus, A. niger, A. fumigates, A. parasiticus, A. caespitosus, A. awamori and A. sclerotiorumthat were grown in potato dextrose broth (PDB) and aflatoxins thereof were measured using high performance liquid chromatography (HPLC) methods. Pure cultures of the aspergilli were prepared and identified to species, and then each species was cultured for 22 days in 50 ml flask containing PDB at 26 ⁰C, 80% humidity and in darkness, conditions similar to natural habitat. Fungal exudates in the broth cultures were extracted with 10 ml chloroform, the organic solvent was evaporated and the precipitate was dissolved in 3ml methanol. After filtration through 0.2 µm milipore filter, the final solute was injected into HPLC instrument. Maximum amount of aflatoxins was secreted by A. parasiticus while aflatoxin G₁ was not produced in A. terreus, A. carneus, A. fumigatus, A. niveus, A. parasiticus, A. caespitosus, A. ostianus and A. niger. As well, A. niveus, A. ostianus, A. niger and A. sclerotiorum did not produce aflatoxin G₂. No aflatoxin B₂ was detected in A. sclerotiorum and A. carneus and no aflatoxin B₁ was detected in A. ostianus. Among the four type of aflatoxins (B₁, B₂, G₁ and G₂), B₁ and G₁ had respectively the maximum and minimum amount of secreted aflatoxins in A. parasiticus.
 

کلیدواژه‌ها [English]

Aspergillus, aflatoxin, HPLC

مراجع

1. Abbas KH, Cartwright DR, Xie W and Shier WT. 2006. Aflatoxin and fumonisin contamination of corn (maize, Zea mays) hybrids in Arkansas. Crop Protection 25: 1–9.
2. Agarwal VK and Sinclair JB. 1997. Seed treatment. pp. 423–460, In: VK Agarwal and JB Sinclair (eds). Principles of Seed Pathology. 2^nd edition. Boca Raton: CRC Press.
3. Almasian S, Hoseini Gh, Sohani-Darban A and Malekzadegan F. 2008. Study of aflatoxin amount in corn meal. Paper Presented at: 18^th National Congress of Food Industry; 15–17 October; Mashad, Iran.
4. Arrus K, Blank G, Abramson D, Clear R and Holley RA. 2005. Aflatoxin production by Aspergillus flavus in Brazil nuts. Journal of Stored Products Research 41: 513–527.
5. Barnett HL and Barry BH. 1979. Illustrated Genera of Imperfect Fungi. 4^th ed. New York: APS Press. 218 p.
6. Chun HS, Kim HJ, Ok HE, Hwang JB and Chung DH. 2007. Determination of aflatoxin levels in nuts and their products consumed in South Korea. Food Chemistry 102: 385–391.
7. D’Mello JPF and MacDonald AMC. 1997. Mycotoxins. Animal Feed Science and Technology 69: 155–66.
8. Fardos B and Magda M. 2009. Trials towards reduction of fungal growth and aflatoxin G₁ production in Arabic coffee using different additives. African Journal of Food Science 3: 68–76.
9. Fente CA, Ordaz JJ, Vazquez BI, Franco CM and Cepeda A. 2001. New Additive for Culture Media for Rapid Identification of Aflatoxin -Producing Aspergillus Strains .Applied and Environmental Microbiology 67: 4858–4862.
10. Gqaleni N, Smith EJ, Laceny J and Gettinby G. 1997. Effects of temperature, water activity, and incubation time on production of aflatoxins and cyclopiazonic acid by an isolate of Aspergillus flavus in surface agar culture. Applied and Environmental Microbiology 63: 1048–1053.
11. Haung Ch. 2007. Mechanism of intraspecific toxin inhibition in Aspergillus flavus. [MSc]. [Baton Rouge (Louisiana)]: Louisiana State University.
12. Khanafari A, Soudi H and Miraboulfathi M. 2007. Biocontrol of Apergillus flavus and aflatoxin B₁ production in corn. Journal of Environmental and Health Science 4: 163–168.
13. Klick MA. 2002. Identification of Common Aspergillus Species. An Institute of the Royal Netherlands of Arts and Sciences, Dordrecht: Centraalbureau Voor Schimmelcultures (CBS) Publishing. 116 p.

14. Mayahi M, Jalali MR and Salamat N. 2007. Isalation of Asperigillus from fish powder, corn and soybean meal and measurement of their aflatoxin contents. Science (Shahid Chamran University) 17: 95–105.

1. Mehdizadeh M, Rabiei M, Moini Namin, M and Asghari Sh. 2008. Role of Asperigillus species in creating aflatoxicose. Journal of Shaeed Sdoughi University of Medical Sciences Yazd 16: 100–107
2. Rahimi E, Kargar AR and Zamani F. 2008. Assessment of aflatoxin B1 levels in animal feed of dairy farms in Chaharmahal & Bakhtiari. Pajouhsh & Sazandegi 79: 66–71
3. Reddy KRN, Reddy CS and Muralidharan K. 2009. Detection of Aspergillus spp. and aflatoxin B1 in rice in India. Food Microbiolog. 26: 27–31.
4. Reddy KRN, Saritha P, Reddy CS and Muralidluran K. 2009. Aflatoxin B1 producing potential of Aspergillus flavus strains isolated from stored rice grains. African Journal of Biotechnology 8: 3303–3308.
5. Reddy SV and Waliyar F. 2008. Properties of afltoxin and it producing fungi. [cited 2013 Jun 10]. Available from: www.aflatoxin. Info/aflatoxin.asp.
6. Ricordy R, Cacci E, Augusti Tocco G. 2005. Aflatoxin B1 and cell cycle perturbation. pp. 213–231, In VR Preedy and R Watson (eds). Reviews in Food and Nutrition Toxicity, 4th ed. London: CRC Press.
7. Rodrigues P, Venâncio A, Kozakiewicz Z and Lima N. 2009. A polyphasic approach to the identification of a flatoxigenic and non-aflatoxigenic strains of Aspergillus section Flavi isolated from Portuguese almonds. International Journal of Food Microbiology 129: 187–193.
8. Scherm B, Palomba M, Serra D, Marcello A and Migheli Q. 2005. Detection of transcripts of the aflatoxin genes aflD, aflO, and af lP by reverse transcription–polymerase chain reaction allows differentiation of aflatoxin-producing and non-producing isolates of Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus. International Journal of Food Microbiology 98: 201–210.
9. Tayebi J and Mirabolfathi M. 2001. Infection of some hybrid corns to B₁ and B₂ aflatoxin and the casual fungus in the field. Journal of Applied Entomology and Phytopathology 69: 79–84
10. Villa P and Markaki P. 2009. Aflatoxin B₁ and ochratoxin A in breakfast cereals from Athens market: Occurrence and risk assessment. Food Control 20: 455–461.